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铁皮石斛近野生栽培实验报告
实验目的：通过虚拟仿真实验，了解珍稀濒危植物铁皮石斛近野生栽培的生理特性、生长特点及实验的基本步骤和操作，熟悉铁皮石斛质量评定标准等操作。
实验内容： 一、实验室铁皮石斛器官培养
二、铁皮石斛近野生栽培技术
三、铁皮石斛病虫害防治
四、铁皮石斛多糖含量测定
一、实验室铁皮石斛器官培养
实验目的：通过铁皮石斛器官培养，掌握器官培养的一般操作过程，及加深了解对实验室铁皮石斛培养的条件要求，及各功能培养基的运用。
实验材料：铁皮石斛茎段
试验试剂：MS基本培养基、75%消毒酒精，0.1%升汞，NAA，6-BA，IBA，蔗糖，琼脂。
实验所用培养基：
愈伤组织诱导培养基： 1/2MS +6-BA1.0mg/L + IBA 1.0mg/L + 蔗糖30g +琼脂7.8g/L
芽诱导培养基：1/2MS+6-BA1.0mg/L +IBA 1.5mg/L 蔗糖30g + 琼脂7.8g/L
芽增殖培养基：1/2MS+6-BA0.5mg/L +IBA 1.5mg/L 蔗糖30g + 琼脂7.8g/L
生根培养基：1/2MS + NAA 1.0mg/L + 蔗糖30g + 琼脂7.8g/L
栽培基质：松树皮
实验步骤：
1、培养基制备
(1)制备MS培养基制备：量筒量取大量元素母液100ml、移液管量取微量元素母液10ml、铁盐母液10ml、有机母液10ml加蒸馏水定容至1L。称取30g蔗糖、7.8g琼脂转移至容量瓶中，用1MHcl、1MNaoH调节PH至5.6-5.8。转移至烧杯，微波炉中加热使充分溶解后，分装至培养瓶，高压蒸汽灭菌121℃、18min。
(2)制备各专项功能培养基
2、外植体的选择、消毒和接种
（1）外植体选择：选择无病、生长健壮铁皮石斛茎段作为外植体
（2）外植体消毒：洗洁精溶液浸泡、流水冲洗，于超净工作台0.1%升汞（氯化汞）消毒10min~20min，无菌水冲洗3-5次。接种于愈伤组织诱导和芽分化培养基上进行培养。
3、愈伤组织诱导和增殖
将接种到愈伤组织诱导培养基上的铁皮石茎段于25±2℃条件下培养，4周后在茎段切口处形成愈伤组织。
- 铁皮石斛芽分化
（1）将铁皮石斛茎段接种到定芽分化培养基上，培养2月后，观察从腋芽部位分化出不定芽
（2）将铁皮石斛茎段和愈伤组织接种到不定芽分化培养基上培养，4-5周继代一次，至少继代3次，从愈伤组织长出多个不定芽
5、芽增殖培养
将分化出的小芽接种到芽增殖培养基中进行培养，2月后长成大苗。
6、不定芽生根培养
将不定芽接种到生根培养基中，基部开始生根并不断生长
7、铁皮石斛试管苗驯化
将铁皮石斛试管苗移到驯化室，拧开瓶盖，驯化1周或更长时间，以便试管苗逐渐适应外界环境
8、铁皮石斛试管苗清洗和根部消毒
小心取出铁皮石斛试管苗，清洗干净基部培养基，用800-1000×多菌灵浸泡根部20-30min，待根试管苗根泛白时移栽。
9、铁皮石斛试管苗移栽：
于每年的春秋两季，以松树皮为栽培基质，将驯化后根部泛白的铁皮石斛苗以3-5株/丛，行距20cm，丛距10cm，栽种到基质中，注意保湿和通风透气，避免阳光直射，待新叶长出后，进行常规栽后管理。
二、铁皮石斛近野生栽培技术
实验目的：通过模拟野生栽培技术，了解铁皮石斛野外生长的特性及环境条件、如何充分有效地利用栽植地，提高成活率。
实验材料与用具：剪刀、铲子、镰刀、栽植人员全套安全设备、耐抗冻强的1.5-2年生铁皮石斛幼苗
实验内容：
- 崖壁附生栽培
2、活树附生栽培
实验步骤：
崖壁附生栽培
（1）选择80-90度的岩壁，近垂直、非正朝西、雨后没有流水的丹霞质地岩壁进行岩壁附生栽培。
（2）操作人员穿上安全服，戴上安全帽，系好安全绳
（3）操作人员到达栽植岩壁后用铲子清除崖面杂草和腐殖质
（4）将耐抗冻强的1.5-2年生种苗按3～5株一丛，丛距25cm行距30cm的模式用钢钉线卡固定或藤本植物固定在崖壁上
注：种植时间宜选取在每年3-5月，
活树附生栽培
（1）选择立木胸径5cm以上，郁闭度50%，周边水源充足的林地和果园。
（2）操作人员将林下灌木杂草、枯枝落叶清理干净
（3）选择1-2年生铁皮石斛种苗，将同一层次的每丛苗的根茎固定在同一水平面上，用无纺布或稻草从根茎处自上而下螺旋捆绑，捆绑时，只可绑其靠近茎基的根系，露出茎基，以利于发芽，但也不能太靠下，否则影响植株固定与直立，影响生长以丛距10cm，层距30cm的间距进行栽种。
（4）春、夏、秋的晴天种植后每天喷雾1-2h，保持树皮湿润，冬天不浇水，不需施肥用药。
注：（1）种植时间宜选取在3月下旬-5月中旬
（2）栽培环境要求温暖、湿润、通风、透气的环境，其中光照与温度为最主要的环境因素。宜选择树干大小适中、树皮不会自然掉皮，易管理的树为铁皮石斛生长的附主，如梨树、松树、杉木、核桃、板栗等树种，不要选择桦木、椿树等会自然掉皮的树。
三、铁皮石斛主要病虫害的防治
1、主要病害及其防治：
（1）白绢病
白绢病发生时，在栽培床表面可见绢状菌丝及中心部位形成褐色菜籽样菌核。该病可导致石斛基部腐烂并向茎、叶扩展，形成毁灭性危害。
防治措施：1、发现病株立即拔除烧毁，并用生石灰粉处理病穴
2、用5%井冈•嘧苷素每亩400-500克，喷施2-3次
3、苯醚甲环唑•嘧菌酯1500倍，喷施2-3次。
（2）白粉病
白粉病在大田栽培时发生较多，一般加强通风可以减轻。
防治措施：1、注意通风，选用25%粉锈宁可湿性粉剂1000～1500倍液喷施２次～３次
2、枯草芽孢杆菌喷施2-3次。
铁皮石斛的主要虫害及其防治
（1）斜纹夜蛾
7月～10月为幼虫高发期，主要为害叶片和嫩芽。
防治方法：
1、利用杀虫灯、性诱剂等诱杀害虫
- 及时摘除卵块或初孵幼虫群集的"纱窗叶"
3、在幼虫低龄期选用高效低毒低残留农药进行喷雾防治，药剂可选用5%氯虫苯甲酰胺，每亩用量45-54克。斜纹夜蛾核型多角体病毒，每克10亿PIB，每亩用量45-50克，或球孢白僵菌，每克400亿个孢子，每亩用量25-30克。
（2）软体动物
蜗牛和蛞蝓在整个生长期都可危害，常咬食嫩叶。一般白天潜伏阴处，夜间爬出活动危害，雨天危害较重。
防治方法：
- 用菜叶或青草毒饵诱杀。即用50%辛硫磷乳油0.5kg加鲜草50kg拌湿，于傍晚撒在田间诱杀
2、在畦四周撒石灰或菜籽饼粉，防止蜗牛和蛞蝓爬入畦内危害。
四、铁皮石斛多糖含量测定
实验目的：掌握铁皮石斛质量评定的方法，学会多糖提取测定的基本操作
实验材料及试剂：3个不同生境的铁皮石斛、无水乙醇、80%乙醇、D-无水葡萄糖、5%苯酚、浓硫酸、蒸馏水
实验步骤：
1、铁皮石斛材料处理
采集3个不同生境的铁皮石斛，采集的样品茎叶分离，将茎80 ℃烘至恒重，粉碎，过60目筛，干燥器储存待用。
2、多糖提取测定
（1）供试品溶液制备
精密称取样品0.3 g，加水200 ml，水浴回流2.5 h，过滤，定容至250 ml，摇匀，精密吸取溶液5 ml 于50 ml离心管中，加无水乙醇25 ml ，摇匀，4 ℃冷藏1 h ,4000 r/min 离心20 min ，弃上清液，往沉淀加入80%乙醇20 ml离心（同上），重复两次，倒掉上清液，加热水溶解定容至50ml。
（2）对照品溶液制备
精密称取干燥至恒重的D-无水葡萄糖对照品10.0 mg于100 ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，配制成0.1 mg/ml的对照品溶液，至冰箱中备用。
（3）标准曲线的制备
精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml分别置于20 ml具塞试管中，各加蒸馏水补足至1 ml ，精密加入5%苯酚溶液1 ml（临用配制），摇匀，再精密加浓硫酸5 ml，摇匀，沸水浴加热20 min，取出，迅速冷却至室温。另以1 ml 蒸馏水为空白，用紫外分光光度计于488 nm 处测定吸光度值。以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。得出总多糖的标准曲线方程为：y = 6.1395x+0.047 ,R2 = 0.9990（n=6）线性范围为0.01~0.1 mg。
（4）样品含量测定
精密吸取供试品溶液1 ml至20 ml具塞试管中，按标准曲线项下方法，自“精密加入5 % 苯酚溶液1 ml起”依照方法测定吸光度值，计算其含量。
根据公式 X=c*v/w*100计算多糖含量
X-样品中粗多糖含量%，C-标准曲线查得样品中葡萄糖的含量mg/mL，V-样品溶液定容体积mL，W-样品重量mg
珍稀濒危植物铁皮石斛近野生栽培虚拟仿真实验报告心得
这个实验让我们不用进入实验室，也能够了解了漫长而繁琐的铁皮石斛野生栽培过程。珍稀濒危植物铁皮石斛近野生栽培虚拟仿真实验主要从培养基、转接、炼苗、移栽、野外种植五个方面设计程序进行网络组培实验。其仿真程度非常高，并不亚于在野外自己实验。但是却帮我们减少了许多，在野外和实验室里面自己动手实验的等待步骤。例如，等苗长大等。
珍稀濒危植物铁皮石斛近野生栽培虚拟仿真实验中我们需要操作试验人物进行采摘铁皮石斛，画风有点像网络游戏用动漫方式让我们明白了铁皮石斛的生活环境究竟是一个如何的环境。
这次珍稀濒危植物铁皮石斛近野生栽培虚拟仿真实验中，我学会了从最基础的吧铁皮石斛采摘到将其进行复杂的实验接种等整个全部组织培养的过程。我觉得，我学会了很多，从在野外到实验室整一个过程都有了深刻的体会。我觉得其中最好的是在于这个系统有了完善的纠错体验，例如当我们明白珍稀铁皮石斛培养基上面是应该如何进行操作时，当我将铁皮石斛放入培养基时，我没有进行酒精消毒，过了一会儿它就出现了，培养基污染现象。这让我知道了这是=一个错误操作。
但是该实验软件也还是有一些问题，例如说我始终打不开他的软件，打开了以后他又告诉我系统不能运行，无法兼容服务器等。虽然网上的操作非常的简便，但是可能是因为新软件还需要进行一段适应期，起码现在我觉得是不太稳定的。
这次实验让我真真正正在网上进行了全过程的实体实验，我觉得这对于我们来说是一个很大的收获，因为本专业在实验室的操作时间非常长，所以导致了我们对于互联网操作的不适应。而这次试验使我们更好地适应了互联网上的操作，让我们知道了网上试验操作是如此的便捷，我觉得对于我们的学习以及以后的学习是有很大帮助的，非常荣幸能参与到该次实验中来。
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